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                   2008年3月6日

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光合細菌的營養份析和毒理評價研究報告

2007/3/12 11:54:05   文章來源:原創   瀏覽次數:16929
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光合細菌的營養份析和毒理評價研究報告   上篇

前言 
   光合細菌(photosynthetic bacteria.PSB)的培養液應用于畜禽,水產養殖,已有很多報導,也進行了各種層次的研究,但尚未具有系統的營養學和毒理學方面的評價。本文以從PSB培養液中收集的菌體(PSBAD)和PSB培養液為實驗材料,對菌種蛋白的生物學效應作了較為完整的營養學與毒理學評價。評價系統和方法 
    根據衛生部營養學和毒理學評價系統以及農業部有關飼料質量評價之有關方法,組成以下三大部份評價測試方法。
一、營養學評價
1、PSBAD主要營養組份測定
(1)粗蛋白測定----凱氏定氮法
   取PSBAD1克消化定容到100ml,取消化液5ml于凱氏定氮器中,以0.0485N的鹽酸滴定氮。
(2)脂肪測定---索氏抽提法:
   取PSBAD5克,將濾紙包和濾紙筒放入提取管內,提取瓶加入2/3體積的無水****,****蒸發後,再烘烤二小時,稱量計算。
(3)還原糖測定------斐林氏滴定法:
   取5克樣品,溶解後,移入250ml的容量瓶中,加入7%硫酸銅10ml,4%氫氧化鈉4ml,加蒸餾水至刻度,靜置半小時,將樣液倒入滴定管,吸取斐林A、B液各5ml于三角瓶中,按斐林氏溶液的標定方法進行滴定。
2、PSBAD的表觀消化率,淨利用率和生物價
(1)實驗動物:
   選用江西省農業科學院畜牧獸醫研究所動物飼養中心的D大白鼠10只,雄性,體重310─330克,實驗前,單籠適應性喂養二天,攝食飲水自由。
(2)飼料配制:
   乾燥後的PSBAD與其它營養物質混合,PSBAD作為飼料中蛋白質的唯一來源,配制後的飼料基礎熱量近370Kcal/100g,每100克飼料中,熱量百分比為蛋白質10%,脂肪25%,澱粉55%。
(3)計算方法:
   單籠適應性喂養二天後,將表面拌有洋紅色的飼料喂養動物,從收集第一次排出的帶有洋紅色的糞便開始,同時定時收集尿液,連續五天,計算每只大白鼠食入飼料量,以凱氏定氮法計算大,小便中的氮的含量,然後計算飼料蛋白質的表觀消化率,淨利用率和生物價。
          蛋白質表觀消化率=(食物中被消化吸收氮的數量)/(食物中含氮總量)
          蛋白質淨利用率=(氮儲留量)/(氮攝入量)
          生物價=(蛋白質淨利用率)/(表觀消化率)
二、毒理學評價
1、大鼠急性口服毒性試驗
    
選用江西省農業科學院畜牧獸醫研究所動物飼養中心SD大鼠6只,3雄3雌,體重175─240克,染毒濃度為0.23g/ml,鑒于灌服量較大,宜在4小時內分二次灌服,中毒後觀察二周,尸解,病理切片鏡檢。
2、骨髓嗜染紅細胞微核試驗:
   
選用江西省農業科學院畜牧獸醫研究所動物飼養中心的ICR小鼠,分四組,共40只,每組雌雄各半,體重20─28克,計有陰性對照組(2%澱粉),陽性對照組(環磷胺20mg/kg體重),PSBAD高劑量組(1/5LD50)和低劑量組(1/10LD50)。除陽性對照組每天腹腔注射外,其餘各組每天灌胃一次,連續五天,于第五天晨處死,取雙側股骨,以小牛血清將骨髓衝出,離心,棄上清液,取沉澱物推片染色,鏡檢1000個嗜染紅細胞微核數,以千分率表示。
3、精子畸變試驗
  
選用江西省農業科學院畜牧獸醫研究所動物飼養中心的SD小白鼠,體重25─35克,雄性,隨機分成五組,即陰性對照組(絲裂霉素MMC0.25%),陽性對照組(環磷胺CP300%)和三個實驗組(1/2 LD50,1/4 LD50,1/8 LD50,)。小白鼠按0.1ml/10g體重劑量灌胃。每組10只,每天早晨灌胃一次,連續五天,然後喂養一個月,于第三十六天處死動物,取雙側附睪,置于生理鹽水中,剪碎,過濾,離心,取沉澱推片,染色鏡檢,每只動物檢1000個精子,以千分率表示。
4、致突變性(Ames)試驗
   
以TA97,TA96,TA100,TA102,為測試菌株,採用Ames等建立的預培養法,實驗分成不加S9,DMSO(二甲亞)溶劑對照組,不加S9,測試樣品六個劑量組,加S9,DMSO溶劑對照組和加S9,測試樣品六個劑量組及各相應的陽性對照組。37℃水浴中速振蕩培養30分後,加入2ml頂層培養基,傾斜平板觀察之。其中TA97+S9,TA96+S9,TA100+S9,TA102+S9,樣品均用2-氨基芴2AF作陽性對照,TA97─S,採用9-氨基呷啶(9AA)TA98-89,採用2,7+二氨基芴(2,7AF),TA100─S,採用SA,TA102─S,採用甲基甲烷磺酸酯MMS作為陽性對照,代謝活化系統為多氯聯苯誘導雄雌wistar大鼠後取肝臟製備S9。
三、肉雞喂養試驗及其非特異性免疫研究
1、PSB菌液應用于肉雞
(1)試驗雞苗及分組
    由江西省農科院畜牧所提供的艾維茵肉雞種5200羽,隨機分為六組,使體重,大小基本一致,初生重抽測經方差分析,差異不顯著(P>0.05)。
(2)光合細菌:由紅假單胞菌屬(Rhodo pseudomoaas)與紅螺菌屬(Rhodospirillaceac)的十餘個菌種的混合菌群,在實驗室培養,含菌數為50億/克以上。
(3)飼料:統一飼喂同一種飼料,由江西省第一飼料廠購買。
(4)飼料方法:地面平養,干料喂養,飼喂光合細菌的組每日早上一次性地摻入飲水中投喂,其它均按常規飼養進行。
2、非特異性免疫球蛋白測定。
  
于33日齡和63日齡留取雞的血清,以醋酸纖維薄膜電泳法檢測免疫球蛋白。
       表一:肉雞喂養試驗小組:
組別
羽數
測重數
平均重量
對照內容
833
30
134.63
新城疫,法氏囊疫苗免疫+傳支(H52)苗免疫
902
30
135.00
新城疫,法氏囊疫苗免疫+傳支(H52)苗免疫+350mlPSB/日群
901
30
133.98
新城疫,法氏囊疫苗,光合細菌400ml/日群
901
30
135.01
新城疫,法氏囊疫苗,光合細菌850ml/日群
830
30
134.02
新城疫,法氏囊疫苗+發生疾病時藥物用光合細菌1000ml/日群
831
30
134.52
常規(新城疫,法氏囊疫苗)對照組。
 
 
 
 
試驗結果 

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